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現(xiàn)在對武漢等10多個地區(qū)都在進(jìn)行病毒IgG抗體檢測,對國外歸國人員及一些復(fù)工復(fù)產(chǎn)單位的員工也進(jìn)行檢測,如果陽性一般提示感染過病毒,但是確實(shí)會有假陽性,就是沒感染過病毒,但結(jié)果提示感染過。
坦率地講,這種假陽性很難完全避免,需要對結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的解讀與認(rèn)識,一般也需要結(jié)合IgM抗體進(jìn)行動態(tài)檢測。
造成特異IgG免疫測定假陽性,通常有以下兩方面的原因:
1.陽性判斷值附近的弱陽性,可能是假陽性檢測判斷陽性與陰性,會設(shè)定一個分界值,高于這個值判斷為陽性,一些剛剛高于陽性判斷值附近的弱陽性,很多并不一定就是陽性,有可能就是假陽性;
膠體金試紙條檢測是通過肉眼觀察顏色有否來判斷陽性和陰性,不存在陽性判斷值的問題,但也會存在不同檢測者判斷的差異。
化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)(CLIA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)需要設(shè)定陽性判斷值,一般是通過測定大量的陰性人群(數(shù)千份)和一定數(shù)量(數(shù)百份)的已知陽性人群標(biāo)本,得到一個分布,用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定陽性判斷值,通常為假陽性和假陰性均較低且達(dá)到平衡狀態(tài)時的測定信號,如OD值或發(fā)光值。
因此,不可避免地處于其周邊陽性一側(cè)的結(jié)果,會有一部分弱陽性,而實(shí)際為假陽性。
依據(jù)陰性和陽性人群檢測值的分布確定陽性判斷值
2.血樣中存在導(dǎo)致假陽性的干擾物質(zhì)1)內(nèi)源性干擾物
一般包括類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、補(bǔ)體、因使用鼠源抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig 抗體等。在日常的臨床血清(漿)標(biāo)本中,有相當(dāng)比例的標(biāo)本不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì),從而可能導(dǎo)致測定結(jié)果的假陽性。
(1)類風(fēng)濕因子(Rheumatoid factors,RF)
在類風(fēng)濕患者、其他疾病包括部分正常人血清中,常含有較高或不同濃度的類風(fēng)濕因子,其通常為IgM型,亦有IgG和IgA型,RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn),因此在免疫測定中,其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的標(biāo)記的特異抗體IgG結(jié)合,從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
(2)嗜異性抗體(Heterophilicantibodies)
人類血清中可能會含有抗嚙齒類動物(如鼠、馬、羊等)的抗體,即天然嗜異性抗體。有研究表明,天然的嗜異性抗體(IgG)可分為兩類,一類(85%的假陽性由其引起)可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域,但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類(15%的假陽性由其引起)可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位,但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過交聯(lián)固相和標(biāo)記的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。
(3)補(bǔ)體
在固相免疫測定中,來自哺乳動物的固相特異抗體和標(biāo)記二抗均可以激活人補(bǔ)體系統(tǒng)。因?yàn)槠湓诠滔辔郊敖Y(jié)合過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu), Fc段的補(bǔ)體C1q結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,這樣C1q就成為一個中介物將二者交聯(lián)起來,從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
(4)因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體
在臨床上,有使用鼠源性單克隆抗體進(jìn)行癌癥等的靶向治療,或者使用放射性核素標(biāo)記鼠源性單克隆抗體進(jìn)行影像診斷等,均有可能使相應(yīng)患者體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體。這種抗鼠抗體對使用鼠源性單克隆抗體的免疫測定,可產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
(5)溶菌酶
溶菌酶可與等電點(diǎn)較低的蛋白有強(qiáng)的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點(diǎn)約為5,因此,在免疫測定中,溶菌酶可在包被的IgG和標(biāo)記的IgG間形成橋接,從而導(dǎo)至假陽性。
2)外源性干擾物
包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長和標(biāo)本凝固不全等。
(1)標(biāo)本溶血
如果樣本中的紅細(xì)胞破了,溶血導(dǎo)致血紅蛋白釋放,由于血紅素基團(tuán)有類似過氧化物的活性,因此,在以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記酶的ELISA和CLIA中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其在溫育過程中會吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色或發(fā)光,導(dǎo)至假陽性。
(2)標(biāo)本貯存時間過長
標(biāo)本在2~8℃下保存時間過長,IgG可聚合成多聚體,在間接法免疫測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性。
答:
mbl是甘露糖結(jié)合凝集素(MBL),結(jié)構(gòu)與C1q 相似,在病原微生物感染早期,由肝細(xì)胞合成和分泌,是急性期蛋白的一種。mbl是可直接識別多種病原生物表面的N氨基半乳糖或甘露糖,進(jìn)而可依次活化MASP1,MASP2,C4,C2,C3,形成一系列酶促反應(yīng)。其構(gòu)成的途徑稱為MBL激活途徑。補(bǔ)體激活途徑的一種,亦稱凝集素途徑。
mbl沒有越南產(chǎn)的。補(bǔ)體經(jīng)典途徑的主要激活物是免疫復(fù)合物。
補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑由抗原抗體復(fù)合物激活,C1q最先與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合繼而依次激活C4、C2、C3形成C5轉(zhuǎn)化酶,啟動補(bǔ)體活化的級聯(lián)酶促反應(yīng)。
這兩個是不同的指標(biāo),肌酐反映的是腎功能水平;C1q是一個免疫炎癥指標(biāo),提示某種自身免疫性疾病可能。這種自身免疫性疾病有可能是腎功能不全的原因,也就是肌酐升高的原因。但兩者沒有必然聯(lián)系。
補(bǔ)體系統(tǒng)各成分通常多以非活性狀態(tài)存在于血漿之中,當(dāng)其被激活物質(zhì)活化之后,才表現(xiàn)出各種生物學(xué)活性。補(bǔ)體系統(tǒng)的激活可以從C1開始;也可以越過C1、C2、C4,從C3開始。前一種激活途徑稱為經(jīng)典途徑(classical pathway)或替代途徑。
“經(jīng)典”,“傳統(tǒng)”只是意味著,人們早年從抗原體復(fù)合物激活補(bǔ)體的過程來研究補(bǔ)體激活的機(jī)制時,發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體系統(tǒng)是從C1開始激活的連鎖反應(yīng)。從種系發(fā)生角度而言,旁路途徑是更為古老的、原始的激活途徑。從同一個體而言,在尚未形成獲得性免疫,即未產(chǎn)生抗體之前,經(jīng)旁路途徑激活補(bǔ)體,即可直接作用于入侵的微生物等異物,作為非特異性免疫而發(fā)揮效應(yīng)。
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